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摘要基于胺基化碳納米管（NH2-CNTs）的非病毒基因遞送系統(tǒng)，用于提高體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)化學(xué)修飾賦予CNTs表面正電荷，優(yōu)化其與質(zhì)粒DNA的結(jié)合能力，并利用威尼德電穿孔儀輔助轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NH2-CNTs/pDNA復(fù)合物在HEK293細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)82.3%的轉(zhuǎn)染效率，且細(xì)胞存活率高于85%。該體系為基因治療載體設(shè)計(jì)提供了新思路。引言基因遞送技術(shù)是基因治療與功能基因組研究的核心挑戰(zhàn)之一。傳統(tǒng)病毒載體雖高效，但存在免疫原性與插入突變風(fēng)險(xiǎn)；脂質(zhì)體及陽(yáng)離子聚合物等非病毒載體...

摘要斑馬魚為模型，探索電穿孔技術(shù)對(duì)魚類尾鰭細(xì)胞及配子的基因轉(zhuǎn)染效率與安全性。通過(guò)優(yōu)化威尼德電穿孔儀參數(shù)，結(jié)合某試劑處理，實(shí)現(xiàn)尾鰭細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率達(dá)75%，配子轉(zhuǎn)染效率達(dá)32%，細(xì)胞存活率高于85%。實(shí)驗(yàn)證實(shí)電穿孔技術(shù)可高效應(yīng)用于魚類基因編輯，為水生生物遺傳學(xué)研究提供新方法。引言魚類作為脊椎動(dòng)物模型，在發(fā)育生物學(xué)和遺傳學(xué)研究中具有重要價(jià)值。尾鰭細(xì)胞因其再生能力強(qiáng)、易于體外培養(yǎng)，成為基因功能研究的理想材料；而配子（精子與卵子）的基因編輯技術(shù)則是遺傳改良與種質(zhì)保存的關(guān)鍵。傳統(tǒng)顯微注射法...

摘要HCVC區(qū)基因重組質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞及小鼠漿細(xì)胞瘤細(xì)胞，結(jié)合紫外交聯(lián)儀、原位雜交儀分析基因表達(dá)差異。結(jié)果顯示，HCVC區(qū)基因在漿細(xì)胞瘤中顯著高表達(dá)，并調(diào)控關(guān)鍵信號(hào)通路。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該基因在腫瘤增殖中的作用，為靶向治療提供了潛在分子靶點(diǎn)。引言真核細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。HCVC區(qū)基因作為染色體上的高變區(qū)，在多種腫瘤中呈現(xiàn)異常表達(dá)模式，但其在小鼠漿細(xì)胞瘤中的作用尚未明確。漿細(xì)胞瘤作為一種B細(xì)胞惡性腫瘤，其增殖與分化失衡常伴隨基因表達(dá)紊亂。本研...

摘要本研究基于膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）基因的真核表達(dá)載體，并驗(yàn)證其生物學(xué)功能。通過(guò)限制性內(nèi)切酶酶切、連接反應(yīng)及轉(zhuǎn)化篩選獲得重組質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，檢測(cè)GDNF表達(dá)水平及細(xì)胞活性。結(jié)果顯示，重組載體顯著提高GDNF分泌并增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用，為GDNF基因治療研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。引言膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）是一種關(guān)鍵神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，對(duì)多巴胺能神經(jīng)元存活及突觸可塑性具有重要作用。近年來(lái)，基于GDNF的基因治療在帕金森病和脊髓損傷等領(lǐng)...

摘要嗜肺軍團(tuán)菌免疫原基因的真核表達(dá)載體，并驗(yàn)證其功能。通過(guò)PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因，克隆至某試劑處理的pcDNA3.1載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，Westernblot驗(yàn)證蛋白表達(dá)。免疫熒光及流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，重組質(zhì)粒可誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答。結(jié)果表明，該載體具備潛在疫苗研發(fā)價(jià)值。引言嗜肺軍團(tuán)菌（Legionellapneumophila）是引起軍團(tuán)菌病的重要病原體，其感染機(jī)制復(fù)雜，臨床防治亟需高效疫苗。免疫原基因作為疫苗開發(fā)的核心靶點(diǎn)，需通過(guò)真核表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)功能...

摘要PCR擴(kuò)增HMGB1基因編碼序列，構(gòu)建真核表達(dá)載體pCDNA3.1-HMGB1，并轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞中驗(yàn)證其表達(dá)。利用威尼德電穿孔儀實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染，Westernblot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平。通過(guò)細(xì)胞增殖、遷移及凋亡實(shí)驗(yàn)分析HMGB1過(guò)表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞功能的影響。結(jié)果表明，HMGB1顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移，抑制凋亡，提示其可能通過(guò)調(diào)控炎癥信號(hào)通路參與腫瘤進(jìn)展。引言HMGB1（HighMobilityGroupBox1）是一種高度保守的核蛋白，廣泛參與DNA修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及炎...

摘要分子克隆技術(shù)構(gòu)建大鼠膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）真核表達(dá)載體，并評(píng)估其在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)效率。實(shí)驗(yàn)采用PCR擴(kuò)增大鼠GDNF基因，經(jīng)酶切連接插入pcDNA3.1載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染細(xì)胞，通過(guò)WesternBlot和免疫熒光檢測(cè)蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示成功構(gòu)建重組載體，GDNF在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)高效表達(dá)，為后續(xù)神經(jīng)再生研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。引言膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）是神經(jīng)系統(tǒng)中重要的多效性生長(zhǎng)因子，具有促進(jìn)神經(jīng)元存活、軸突再生及突觸可塑性調(diào)控等功...

摘要雙拷貝X基因缺失型HBVDNA質(zhì)粒，并評(píng)估其在細(xì)胞模型中的轉(zhuǎn)染效率及生物學(xué)效應(yīng)。通過(guò)限制性內(nèi)切酶切除X基因片段，構(gòu)建缺失型質(zhì)粒，經(jīng)威尼德分子雜交儀驗(yàn)證序列正確性后，采用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)HBVDNA復(fù)制水平顯著降低，證實(shí)X基因缺失對(duì)病毒復(fù)制的調(diào)控作用。該模型為HBV致病機(jī)制研究提供了新工具。引言乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球肝硬化和肝癌的主要誘因之一。X基因（HBx）是HBV基因組中重要的調(diào)控因子，參與病毒復(fù)制、宿主基因表達(dá)調(diào)控及肝...